Cara Membuat Antigen

Cara Membuat Antigen - Suspensi bakteri yang telah dibakukan untuk dipakai sebagai antigen dapat diperoleh sebagai bahan dagangan . telah ditemukan bahwa suspense dalam bulyon nutrisi yang ditambah formalin menghasilkan antigen-H lebih banyak dari suspense dalam larutan garam fisiologis yang diberi formalin.

Ilustrasi

Cara membuat antigen-H adalah sebagi berikut.

1. Galur yang digunakan, misalnya Salmonella. Diambil dari koloni tipe S (smoath) dan gerak aktif.
2. Untuk pemeriksaan gerak cukup digunakan medium pembiakan setengah padat dengan dua kali pemindahan. Kemudian dilakukan penanaman dalam tabung kecil yang berisi bulyon atau ”trypticase soy broth” , cdan dierammkan pada suhu 37 derajat Celsius selama 3-4 jam.
3. Dari biakan tersebut diatas diambil kira-kira 3 ml, dan dimasukkan kedalam 100 ml bulyon, dieramkan pada suhu kamar selama 24 sampai 48 jam.
4. Dalam biakan kedua ini ditambahkan formalin (formaldehida 40%) secukupnya untuk memperoleh konsentrasi 0,3% v/v. Selanjutnya disimpan dalam lemari es selama 48 jam.
5. Uji sterilitas dilakukan dengan menanam 0,5 ml suspense baktri itu kedalam 15-20ml bulyon steril dan dieramkan selama 48 jam pada suhu 47 derajat Celsius.
6. Bila ternyata suspense itu steril, dilakukan pengenceran dengan larutan dapar posfat (pH 6,8-7,0) yang mengandung 0,3% formalin, sehingga diperoleh suspense dengan keseluruhan kihra-kira sama dengan suspensi kekeruhan kira-kira sama dengan suspense nomor 3-Brown.
7. Untuk stabilisasi, suspensi disimpan dalam lemari es selama dua minggu Antigen ini dapat disimpan sampai setahun.

Cara membuat antigen-O, seperti dari jenis-jenis Salmonella typhi, Salmonella paratyphi A, B, C Poteus OX, OX-19 dan OXK adalah sebagai berikut

1. Bila galu yang digunakan tidak bergerak, caranya sama seperti pada pembuatan antigen-H, tetapi pasasi melalui medium pembiakan setengah padat ditiadakan.
2. Bila galur yang digunakan motil (motile) caranya adalah sebagai berikut

• Bahan pertama dibuat dalam bulyon dari koloni S

• Kedalam botol Roux atau pinggang petri besar yang berisi medium pembiakan, ditahan suspensi biakan sebanyak 4-6 ml. agar pertumbuhan merata, diusahakan suspensi itu menutupi seluruh permukaan medium. Sisa suspense dipisahkan dengan pipet, pengeraman dilakukan pada suhu 37 derajat Celsius selama 18-20 jam
• Hasil pertumbahan dikumpulkan dengan cara disuspensikannya dalam 15-20 ml NaCl fiologis.
• Suspense yang diperoleh dicampur dengan alcohol 95% dalam perbandingan  4 volum alcohol dan 1 volum suspense kemudian ditutup dengan prop karet steril dan dikocok selam 30 menit
• Suspense kemudian disimpanpada tempat hyang gelap selama 48 jam.
• Suspensi selanjutnya disentrifus dan air supernatannya dibuang dan cuci dua kali dengan NaCl fisiologis.
• Endapan yang disuspensikan kembali dengan larutan dapar fosfat pH 6,8-7,0 yang mengandung 0,2% formalin. Konsentrasi ini dapat dipertahankan sebagai persediaan setelah kepekatannya ditemukan menurut derajat kekeruhan yang dikehendaki. Untuk keperluan uji aglutinasi suspensi diencerkan sampai kekeruhan Brown-nomor 3.